奧林巴斯醫用研究級熒光CX43相差顯微鏡的操作步驟主要包括以下環節:
一、開機與檢查
放置顯微鏡:將顯微鏡放置在平整、穩定的桌面或實驗臺上,確保顯微鏡穩定不晃動,且使用環境無塵無污染,以免影響觀察精度。
接通電源:打開電源開關,確保顯微鏡能夠正常啟動和工作。
檢查光學部件:檢查物鏡、目鏡、聚光鏡等光學部件是否清潔無污物,如有必要,使用鏡頭紙或吹風機輕輕吹拂進行清潔。
二、樣品準備與放置
采集樣品:根據實驗需求,采集新鮮的、具有代表性的樣品。
制作樣品:將樣品制作成涂片或切片,確保樣品平整且薄,以便光線能夠穿透并形成清晰的圖像。對于熒光觀察,如果樣品本身沒有自發熒光,還需要進行熒光標記。
放置樣品:將載有樣品的載玻片放在載物臺上,用樣品夾牢固夾住樣品,以防其移動或脫落。奧林巴斯CX43的優勢在于其多用樣品夾適用于多種樣品類型,可以單手快速地將樣品放入或取出。
三、顯微鏡調節與觀察
調節載物臺:通過調節載物臺的X/Y向移動,以及W/D(行程)調節,使樣品能夠清晰地展現在視野內。
調節光源:根據需要調節光源的亮度和角度,確保光線能夠均勻且穩定地照射在樣品上。如果是熒光觀察,則需要打開熒光光源,并讓其預熱一段時間以達到穩定狀態。
選擇物鏡:根據實驗需求,選擇合適的物鏡進行初步觀察。通常從低倍物鏡開始,如10倍或20倍物鏡。奧林巴斯CX43顯微鏡的物鏡具有平場消色差的功能,倍數也可實現10倍、40倍、100倍等的變化。
粗調焦:使用粗調焦旋鈕,將物鏡移動到接近樣品的位置,以便快速找到成像范圍。
細調焦:當粗調焦找到成像范圍后,使用細調焦旋鈕進行微調,直至成像清晰。奧林巴斯CX43高效的調焦旋鈕可以使操作者在使用顯微鏡觀察的同時,將雙手及前臂放在觀察臺上,有助于提升操作舒適度。
低倍觀察:在低倍鏡下,快速找到樣品的大致位置,并調節焦距和照明,使樣品邊緣輪廓清晰可見。
相差觀察:如果需要進行相差觀察,應選擇合適的相差物鏡(如20倍、40倍相差物鏡),并轉動相差顯微鏡的相差調節環,使相差環與物鏡上的相差板對齊,以獲得最佳的相差效果。
熒光觀察:
選擇合適的熒光濾光片組:根據所使用的熒光染料或熒光蛋白的激發和發射光譜,選擇相應的熒光濾光片組。
切換到熒光光路:通過顯微鏡上的光路切換裝置,將光路從明場或其他觀察模式切換到熒光模式。
調節激發光強度:使用熒光光源的強度調節旋鈕,將激發光強度調整到合適的水平。
高倍觀察:切換到高倍物鏡(如40倍、60倍或100倍)進行更細致的觀察。在切換物鏡時,應從側面觀察物鏡與樣本的距離,避免物鏡與樣本相撞。在高倍鏡下,可以根據需要調節光圈和聚光鏡,使光線適中,確保樣品圖像清晰且亮度適宜。
四、圖像記錄與處理
記錄圖像:如有需要,可以通過連接成像系統(如數字攝像頭),將觀察到的圖像傳輸到電腦上進行拍照、錄像、編輯等操作。同時,記錄觀察時間、樣本來源、觀察條件以及觀察到的樣品特征等信息。
圖像分析:利用圖像分析軟件對拍攝的圖像進行測量、分析,如測量細胞大小、熒光強度等,還可進行圖像增強、降噪等處理,以提高圖像質量。
五、關機與清理
關閉光源:觀察結束后,先關閉熒光光源或其他光源的電源,以延長光源的使用壽命。
切換回其他光路模式:將顯微鏡的光路切換回明場或其他常用的觀察模式。
取下樣品:小心取下樣品,清理載物臺,保持顯微鏡的清潔和整潔。
關閉顯微鏡電源:最后關閉顯微鏡的總電源開關。
請注意,在使用奧林巴斯醫用研究級熒光CX43相差顯微鏡時,應嚴格按照操作手冊進行操作,并確保實驗環境的整潔與安全。