如何制作動(dòng)物染色體標(biāo)本

    細(xì)胞處于活躍的增值狀態(tài)或者通過(guò)人工的各種處理后，細(xì)胞進(jìn)入分裂的動(dòng)物組織科用于染色體的分析。由于在正常的動(dòng)物骨髓內(nèi)，細(xì)胞是處于不斷分裂的，給其注射一定的秋水仙堿可以讓許多細(xì)胞處于分裂的細(xì)胞停在細(xì)胞分裂中期，然后采用常規(guī)空氣干燥法制備染色體，即可得到大量可分析的染色體標(biāo)本。

    實(shí)驗(yàn)用品

　　一、 材料

　　小白鼠

　　器材

　　水平離心機(jī)、顯微鏡、刻度離心管（10ml）、注射器（1ml）、載玻片、燒杯（400ml）、量筒（100ml）、試管架、鑷子、剪刀、解剖刀、吸管。

　　二、 試劑

　　1. 2%檸檬酸鈉溶液：稱取2g檸檬酸鈉（檸檬酸三鈉，Tri-sodium citrate, AR）溶解于100ml蒸餾水中。

　　2. 1%檸檬酸鈉溶液。

　　3. 500μm/ml、100mg/ml秋水仙素溶液。

　　4. Giemsa（姬姆薩）原液（pH6.8）

　　Giemsa染粉 1g

　　甘油（丙三醇，glycerine, AR） 33ml

　　甲醇（methyl alcoholA, AR） 45ml

　　將染粉傾入乳缽，加幾滴甘油，在乳缽內(nèi)研磨直到無(wú)顆粒為止，此時(shí)再將全部剩余甘油倒入，放入60～65℃保溫箱中保溫2h后，加入甲醇攪拌均勻，保存于棕色瓶中備用。

　　5. 0.067mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.8）

　　Na2HPO4·12H2O11.81g

　　（或Na2HPO4·2H2O 5.92g）

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　　Ⅰ.小白鼠骨髓細(xì)胞染色體的制備方法

　　實(shí)驗(yàn)方法

　　1.動(dòng)物按4μg/g體重的劑量經(jīng)腹腔注射秋水仙素，3～4h后殺死動(dòng)物。

　　2.取出動(dòng)物后肢的脛骨和股骨。剪去兩端。

　　3.將0.6～1ml 2%檸檬酸鈉用1ml注射器接上5#針頭注入骨髓腔，將骨髓細(xì)胞先沖入小碟取下注射器針頭，反復(fù)吸打骨髓細(xì)胞，使細(xì)胞團(tuán)塊分散，轉(zhuǎn)入10ml離心管。

　　4.視骨髓量之多寡加入0.4%KCl溶液8～10ml，隨即將離心管置37±0.5℃水浴中低滲15～20min

　　5.以1000r/min離心8min

　　6.棄上清液，沿離心管壁緩慢加入新配制的甲醇:冰醋酸（3:1）固定液5ml，加固定液時(shí)注意不要沖動(dòng)細(xì)胞團(tuán)塊。

　　7.加完固定液后，立即用吸管將細(xì)胞輕輕吸打均勻，靜置固定20min。如此反復(fù)固定2～3次，每次20min。

　　8.固定的細(xì)胞經(jīng)離心后，吸取上層固定液，視管底的細(xì)胞多寡加入少量新配制的固定液，將細(xì)胞團(tuán)塊輕輕吸打成懸液。

　　9.在干凈、濕、冷的載玻片上滴2～3滴上層細(xì)胞懸液，在酒精燈上文火烘干（在空氣干燥的地方可不用）。

　　10.將玻片標(biāo)本平放于支架上，細(xì)胞面朝上，每片滴加1:100 Giemsa磷酸鹽緩沖液3～4ml，染色10min。

　　11.在自來(lái)水管下細(xì)流沖洗數(shù)秒，去掉Giemsa磷酸鹽緩沖液，用小塊紗布擦干玻片標(biāo)本底面和四周，顯微鏡觀察和分析。

　　通過(guò)以上步驟就制備出可以進(jìn)行觀察的小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本，用相應(yīng)的顯微鏡及可進(jìn)行觀察實(shí)驗(yàn)。